[1]王玉梅)△,盛光耀).人PTEN基因RNA干扰及其RESC救援慢病毒载体的构建与鉴定[J].郑州大学学报(医学版),2010,(03):443-447.
 WANG Yumei),SHENG Guangyao).Construction and identification knockdown and RESC concurrent rescue of RNAi lentiviral vector on human PTEN gene[J].JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES),2010,(03):443-447.
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人PTEN基因RNA干扰及其RESC救援慢病毒载体的构建与鉴定 ()
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《郑州大学学报(医学版)》[ISSN:1671-6825/CN:41-1340/R]

卷:
期数:
2010年03期
页码:
443-447
栏目:
论著
出版日期:
2010-05-15

文章信息/Info

Title:
Construction and identification knockdown and RESC concurrent rescue of RNAi lentiviral vector on human PTEN gene
作者:
王玉梅123)盛光耀1)
1)郑州大学第一附属医院儿科郑州4500522)郑州大学第三附属医院儿内科郑州4500523)美国圣路易斯华盛顿大学医学院血液系密苏里州631101093
Author(s):
WANG Yumei123)SHENG Guangyao1)
关键词:
PTEN基因慢病毒载体RNA干扰逃避RNA干扰策略结构脱靶效应
Keywords:
PTEN genelentiviral expression vectorRNA interferenceRNA interference escape strategy constructofftarget effect
分类号:
Q782
摘要:
构建人PTEN基因RNA干扰(RNAi)及其逃避RNAi策略结构(RESC)救援的慢病毒载体。方法:利用Invitrogen公司在线软件,针对已筛选确定的PTEN基因RNAi有效靶序列,设计并合成靶序列的oligoDNA,退火形成双链DNA,与经XbaⅠ和XhoⅠ酶切后的pFLRuGFP载体连接构建成pFLRuU6shPTEN慢病毒载体。在此基础上,引入外源设计的PTENmRNA,与经EcoRⅠ和BamHⅠ酶切后的pFLRuU6shPTEN 载体连接,从而产生在同一个载体内兼有人PTEN基因shRNA及其救援 cDNA同时表达的RESC 慢病毒载体pFLRuU6rrshPTEN。2者均转入到大肠杆菌XL10感受态细胞,制备质粒并用酶切及测序鉴定。分别用pFLRuU6shPTEN、pFLRuU6rrshPTEN与pCMVdR8.2ΔR 和pCMVVSVG质粒共转染293T包装细胞,包装产生2种慢病毒,收集病毒上清,系列稀释法检测病毒悬液的滴度。结果:氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆、酶切鉴定、U6前引物测序鉴定结果显示pFLRuU6shPTEN和pFLRuU6rrshPTEN均为阳性克隆,且2种慢病毒的滴度分别为6.6×105和5.6×105 pfu/mL。结论:成功构建出人PTEN基因RNAi及其RESC慢病毒载体。有效地避免了由于脱靶效应所引起的假阳性结果对实验的干扰,为研究PTEN基因功能提供了稳定的转染细胞载体。
Abstract:
To construct the lentiviral expression vectors of human PTEN for RNAi and for concurrent rescue of RNAi escape strategy construct (RESC).Methods:PTEN shRNA sequence of human was designed by online designer software on Corp.

参考文献/References:

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备注/Memo

备注/Memo:
△女,1962年11月生,博士研究生,主任医师,研究方向:小儿血液病/肿瘤学,Email:wangyumei15@yahoo.com.cn
更新日期/Last Update: 2010-05-28