[1]张丽梅),冯龙),张艳敏),等.人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达[J].郑州大学学报(医学版),2010,(04):603.
 [J].JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES),2010,(04):603.
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人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达()
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《郑州大学学报(医学版)》[ISSN:1671-6825/CN:41-1340/R]

卷:
期数:
2010年04期
页码:
603
栏目:
论著
出版日期:
2010-07-30

文章信息/Info

作者:
张丽梅12)冯龙3)张艳敏1)马晶3)赵国强3)安玉会2)鲍玉洲12)
1)河南省眼科研究所分子生物室 郑州450003
2)郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 郑州 450001
3)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室 郑州 450001
关键词:
人表皮生长因子慢病毒载体基因构建
文献标志码:
A
摘要:
目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体。方法:酶切并收集pcDNA 3.1hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LVGFPhEGF与辅助载体pΔ8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,进行病毒包装。收集上清液,按按10-1~10-7倍比稀释后培养,检测病毒滴度;裂解细胞,进行Western Blot分析。结果:PCR扩增 、HindⅢ酶切鉴定及测序结果均证实LVGFPhEGF构建成功。将LVGFPhEGF转染293T细胞,紫外光下检测可见绿色荧光;LV滴度达5×108 TU/mL,转染效率>75%,Western Blot证实转染细胞可表达hEGF。结论:成功构建了含有GFP报告基因的hEGF慢病毒载体,包装后的慢病毒可在293T细胞内高效表达。

参考文献/References:

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