[1]张磊,崔柳青,李杰,等.杜氏盐藻葡萄糖6磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备[J].郑州大学学报(医学版),2010,(06):910.
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杜氏盐藻葡萄糖6磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备
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《郑州大学学报(医学版)》[ISSN:1671-6825/CN:41-1340/R]

卷:
期数:
2010年06期
页码:
910
栏目:
论著
出版日期:
2010-11-30

文章信息/Info

作者:
张磊崔柳青李杰
郑州大学生物工程系细胞生物学研究室 郑州 450001
关键词:
葡萄糖GAAB26GAAB2磷酸异构酶原核表达抗体制备杜氏盐藻
文献标志码:
A
摘要:
目的:纯化杜氏盐藻葡萄糖GAAB26GAAB2磷酸异构酶(GPI)重组蛋白,制备多克隆抗体。〖HTH〗方法〖HTSS〗:PCR扩增得到两端分别添加NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的GPI基因,双酶切后插入原核表达载体pET28a(+),得到重组载体pET28aGAAB2GPI,经鉴定正确后,用该重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后用镍离子柱纯化目的蛋白并免疫新西兰白兔,间接ELISA和Western blot法检测抗体的效价和特异性。〖HTH〗结果〖HTSS〗:杜氏盐藻GPI基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,占总蛋白的41.6%。以高纯度的目标蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,得到抗GPI的抗血清。间接ELISA检测抗血清效价达到1GA6FA512 000,Western blot检测证实抗血清能与目的蛋白特异性结合。〖HTH〗结论〖HTSS〗:成功纯化了杜氏盐藻GPI重组蛋白并制备了特异性的GPI多克隆抗体。

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更新日期/Last Update: 2010-12-01