[1]宋英,董明敏#,杨海峰.一个编码4个不同基因RNAi的shRNA质粒的构建及其对CNE2Z细胞增殖、凋亡和小鼠鼻咽癌移植瘤的影响[J].郑州大学学报(医学版),2010,(06):972.
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一个编码4个不同基因RNAi的shRNA质粒的构建及其对CNE2Z细胞增殖、凋亡和小鼠鼻咽癌移植瘤的影响
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《郑州大学学报(医学版)》[ISSN:1671-6825/CN:41-1340/R]

卷:
期数:
2010年06期
页码:
972
栏目:
论著
出版日期:
2010-11-30

文章信息/Info

作者:
宋英1董明敏1#杨海峰2
1)郑州大学第一附属医院耳鼻喉科 郑州4500522)郑州市管城区疾病预防控制中心疾病控制科 郑州 450000
关键词:
质粒构建与鉴定短发卡RNA鼻咽癌CNEGAAB22Z细胞小鼠
文献标志码:
A
摘要:
目的:构建同时表达VEGF、cGAAB2myc、survivin和hTERT基因的shRNA真核表达质粒,研究其对人鼻咽癌细胞系CNEGAAB22Z的干扰作用。〖HTH〗方法〖HTSS〗:根据VEGF、cGAAB2myc、survivin和hTERT基因序列,各设计2条寡核苷酸序列,合成互补DNA链,插入真核表达质粒pGenesilGAAB21中,同时构建单基因(VEGF)质粒pGenesilGAAB22。分别转染CNEGAAB22Z细胞,分为多基因质粒(PGAAB21)组和单基因质粒(PGAAB22)组,并设空白对照(BC)组和阴性对照(NC)组。采用MTT法检测细胞增殖活性。 采用实时定量 PCR和WesternGAAB2blot检测4种基因在人鼻咽癌细胞系CNEGAAB22Z中的表达。体内裸鼠成瘤实验观察单基因和多基因质粒干预对肿瘤的抑制作用。〖HTH〗结果〖HTSS〗:通过酶切和测序证实重组真核表达载体构建正确。MTT显示细胞增殖受到抑制,且多基因质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因质粒。目的基因在mRNA和蛋白水平上表达均下降。裸鼠实验显示PGAAB21组抑制肿瘤细胞增长的作用要强于PGAAB22组。〖HTH〗结论〖HTSS〗:成功构建一个载体编码4个不同基因的shRNA质粒载体系统。转染鼻咽癌细胞后,与单独沉默VEGF相比,同时干扰VEGF、cGAAB2myc、survivin和hTERT基因可以更好地抑制细胞增殖。
更新日期/Last Update: 2010-12-01